Принципы санитарно микробиологических исследований исключают. Санитарная микробиология

⁰

(предусматривают определение общей микробной обсеменённости (ОМЧ), определение и титрование санитарно-показательных микроорганизмов).

Санитарно состояние почвы – совокупность физико-химических, биологических свойств почвы, определяющих качество и степень её безопасности в эпидемическом и гигиеническом отношении. Состав микрофлоры почвы меняется в зависимости от её глубины. В поверхностном слое почвы (0 – 10 см) количество микроорганизмов незначительно; это связано с губительным действием прямого солнечного света и низкой влажностью почвы. Максимальное количество микроорганизмов обнаруживается на глубине 10 - 30 см. На глубине 1 м выявляются единичные клетки бактерий. Наиболее богата микроорганизмами культурная возделываемая почва (до 5 млрд. клеток на 1 г почвы), наимеее - почва, бедная влагой и органическими веществами (200 млн. клеток в 1 г). Оценка санитарного состояния почвы проводится по санитарно-бактериологическим показателям, которые делятся на косвенные и прямые.

Косвенные показатели характеризуют интенсивность биологической нагрузки на почву. Это санитарно-показательные микроорганизмы: бактерии группы кишечной палочки (общие колиформные бактерии) и энтерококки. В крупных городах с высокой плотностью населения биологическая нагрузка на почву очень велика и, как следствие, высоки индексы санитарно-показательных микроорганизмов, что наряду с санитарно-химическими показателями свидетельствует о неблагополучии и создании повышенного риска инфицирования. На свежее фекальное загрязнение почвы указывает наличие высокого индекса БГКП при низких титрах нитрификаторов, термофилов, а также относительно высокое содержание вегетативных форм Clostridium perfringens. Обнаружение энтерококков всегда свидетельствует о свежем фекальном загрязнении, каковы бы ни были другие показатели.

Прямые санитарно-бактериологические показатели эпидемической опасности почвы – обнаружение возбудителей кишечных инфекций (патогеннные энтеробактерии, энтеровирусы). Результаты анализов оцениваются в соответствии с таблицей «Оценка степени эпидемической опасности почвы».

Оценка степени эпидемической опасности почвы

При необходимости углубленной оценки санитарного состояния почвы и способности её к самоочищению исследуют показатели биологической активности почвы. Основными интегральными показателями биологической активности почвы являются: общая микробная численность (ОМЧ), клостридии, термофильные бактерии, грибы, актиномицеты, аммонификаторы.

Для определения ОМЧ почву берут на глубине 10-15 см стерильным ножом (из разных мест не менее 10 проб) в стерильную банку. Из проб готовят навеску 30 г, которую вносят в колбу с водой (270 мл) и тщательно встряхивают. Готовят разведения 10 -3 , 10 -4 , 10 -5 . Из 2-х последних разведений 0,1 мл смешивают с 40 мл 0,7% расплавленного и остуженного до 45 0 С МПА, после чего выливают двойным слоем в чашки с 2% агаром. Инкубируют в термостате. Подсчитывают количество выросших колоний.

Санитарно-микробиологическое состояние питьевой воды оценивается по общему микробному числу (ОМЧ) – количеству мезофильных факультативно-анаэробных микроорганизмов (МЕФАМ) в 1 мл воды; присутствию общих и термотолерантных колиформных бактерий.

По эпидемиологическим показаниям, в воде дополнительно определяют наличие энтерококков, сальмонелл, шигелл, вибрионов, энтеровирусов.

Определение общего числа микроорганизмов

Общее микробное число (ОМЧ) - общее число мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов, способных образовывать колонии на питательном агаре при t=37 0 в течение 24 часов, видимые с увеличением в 2 раза.

Из каждой пробы воды делают посев не менее двух объёмов по 1 мл. Для этого 1 мл воды вносят в стерильную чашку Петри, заливают 6-8 мл расплавленного и остуженного до 45-46 0 С питательного агара, тщательно перемешивают. После застывания агара чашки помещают вверх дном и инкубируют при 37 0 С в течение 24 часов. Затем подсчитывают все выросшие на чашке колонии, наблюдаемые при увеличении в 2 раза. Подсчитанное количество колоний на каждой чашке суммируют и делят на 2. Результат выражают в КОЕ (колониеобразующих единиц) в 1 мл исследованной пробы воды.

Определение общих и термотолерантных колиформных бактерий

К общим колиформным бактериям относятся грамотрицательные, не образующие споры палочки, не обладающие оксидазной активностью ферментирующие лактозу или маннит с образованием альдегида, кислоты и газа при 37 0 С в течение 24 часов.

Термотолерантные колиформные бактерии обладают всеми признаками общих колиформных бактерий, но, кроме того, способны ферментировать лактозу до кислоты и газа при 44 0 С в течение 24 часов.

Питьевой воды

(согласно СанПиНу 2.1.4.559–96)

Примечания: 1 – при определении проводится 2-кратное исследование по 100 мл отобранной пробы воды; 2 – превышение норматива не допускается в 95% проб, отбираемых в точках водоразбора наружной и внутренней водопроводной сети в течение 12 месяцев, при количестве исследуемых проб не менее 100 за год; 3 – определение проводится только в системах водоснабжения из поверхностных источников перед подачей воды в распределительную сеть; 4 – определение проводится только при оценке эффективности технологии обработки воды.

Метод мембранных фильтров

Мембранный фильтр помещают в воронку Зейтца, вмонтированную в колбу Бунзена, которая присоединяется к вакуумному насосу. Воду фильтруют в объёме 333 мл. Затем фильтры Зейтца помещают на поверхность среды Эндо в чашки Петри и после инкубации при 37 0 С в течение суток подсчитывают количество выросших колоний, типичных для БГКП. Из 2-3 колоний красного цвета готовят мазки, окрашивают по Граму и ставят оксидазный тест, позволяющий дифференцировать бактерии родов Escherichia, Citrobacter и Enterobacter от грамотрицательных бактерий семейства Pseudomonadaceae и других оксидазоположительных бактерий, обитающих в воде. Для этого фильтр с выросшими на нём колониями бактерий переносят пинцетом, не переворачивая, на кружок фильтровальной бумаги, смоченной диметил-n-фенилендиамином. При наличии оксидазы индикатор окрашивает колонию в синий цвет. 2-3 колонии, не изменившие первоначальную окраску, засевают в полужидкую среду с 0,5% раствором глюкозы. Посевы инкубируют в течение суток при 37 0 С. При наличии газообразования подсчитывают число красных колоний на фильтре.

Бродильный метод

Засевают 3 объёма воды по 100 мл (для качественного анализа) или при исследовании воды с целью количественного определения общих колиформных бактерий делают посев 3 объёмов по 100 мл, 3 – по 10 мл и 3 – по 1 мл.

Посев 100 мл и 10 мл воды производят в 10 и 1 мл концентрированной лактозо-пептонной среды, посев 1 мл воды – в 10 мл среды обычной концентрации.

Посевы инкубируют при 37 0 С в течение 24-48 часов. Через 24 часа из питательной среды, где отмечено наличие роста и образование газа , делают высев по секторам на среду Эндо, приготовленную с добавлением фуксина.

Положительный результат на присутствие общих колиформных бактерий в данном объёме воды дают по помутнению и образованию газа на среде накопления (глюкозо-пептонная среда или лактозо-пептонная среда) и наличию красных колоний на среде Эндо. В сомнительных случаях выполняют оксидазный тест и подтверждают способность к газообразованию на среде с лактозой или маннитом (глюкозой).

Результат отрицательный , если

– в среде накопления нет признаков роста,

– на секторах среды Эндо нет роста лактозоположительных колоний,

– на секторах среды Эндо выросли нехарактерные для колиформных бактерий колонии,

– все колонии оказались оксидазоположительными,

– если в подтверждающем тесте на среде с лактозой или маннитом (глюкозой) не отмечено газообразования.

Наиболее вероятное число (НВЧ) бактерий (общих и термотолерантных колиформных бактерий) – вычисляют по специальным таблицам.

Санитарно-микробиологическое состояние воздуха закрытых помещений оценивают по общему микробному числу (ОМЧ) – количеству особей, обнаруживаемых в 1 м 3 воздуха, наличию санитарно-показательных бактерий: гемолитических стрептококков, золотистых стафилококков, а также дрожжевых и плесневых грибов.

Согласно СанПиН 2.1.3.1375-03, воздушная среда помещений лечебных учреждений и аптек по уровню бактериальной обсеменённости разделена на 4 класса.

Микробиологические показатели для оценки воздушной среды аптечных учреждений можно определить путём посева воздуха седиментационным (по Коху) или аспирационным методом (в аппарате Кротова).

Допустимые уровни бактериальной обсеменённости воздушной среды помещений лечебных учреждений в зависимости от их
функционального назначения и класса чистоты

Класс чистоты	Название помещений	Санитарно-микробиологические показатели
общее количество микроорганизмов в 1 м 3 воздуха (КОЕ/м 3)	количество колоний S.aureus в 1 м 3 воздуха (КОЕ/м 3)	количество плесневых и дрожжевых грибов в 1 дм 3 воздуха
до начала	во время работы	до начала	во время работы	до начала	во время работы
Особо чистые (А)	Операционные, родильный зал, асептические боксы для гематологических, ожоговых больных, палата для недоношенных, асептический блок аптек, стерилизационные (чистая половина) боксы бактериологических лабораторий	не более 200	не более 500	не должно быть	не должно быть	не должно быть	не должно быть
Чистые (Б)	Процедурные, перевязочные, предоперационные, палаты реанимации, залы реанимации, детские палаты, комнаты сбора и пастеризации грудного молока, ассистентские и фасовочные аптек, дистилляторная, помещения бактериологических и клинических лабораторий, предназначенные для исследований	не более 500	не более 750	не должно быть	не должно быть	не должно быть	не должно быть
Условно чистые (В)	Палаты хирургических отделений; коридоры, примыкающие к операционным и родильным залам; смотровые, боксы и палаты инфекционных отделений, ординаторские, материальные, кладовые чистого белья	не более 750	не более 1000	не должно быть	не более 2	не должно быть	не должно быть
Грязные (Г)	Коридоры и помещения административных зданий, лестницы, лечебно-диагностические, санитарные комнаты, туалеты, комнаты грязного белья	Не нормируются

Седиментационный метод (по Коху) – оседание микробов под действием силы тяжести - является простым способом изучения микрофлоры воздуха. Он заключается в том, что чашки Петри со средой оставляют открытыми на определённое время (5-10 минут на общую обсеменённость и не менее 40 минут на кокковую микрофлору), затем их закрывают, маркируют и выдерживают 24 часа в термостате и 24 часа при комнатной температуре. Количество выросших колоний соответствует степени загрязнённости воздуха: по приблизительному подсчёту на площадь 100 см 2 в течение 5 минут оседает столько микробов, сколько их содержится в 10 л воздуха.

Аспирационный метод – более точный количественный метод определения микробного числа воздуха. Посев воздуха осуществляется с помощью приборов. Аппарат Кротова устроен таким образом, что воздух с заданной скоростью просасывается через узкую щель плексигласовой пластины, закрывающей чашку Петри с питательным агаром. При этом частицы аэрозоля с содержащимися на них микроорганизмами равномерно фиксируются на всей поверхности среды благодаря постоянному вращению чашки под входной щелью.

После инкубации посева в термостате проводят расчёт микробного числа по формуле:

ОМЧ	=	N х 1000
V

где N – количество выросших на чашке колоний;

V – объём пропущенного через прибор воздуха, дм 3 ;

1000 - искомый объём воздуха, дм 3 .

Наличие санитарно-показательных для воздуха микроорганизмов – золотистого стафилококка, гемолитического стрептококка, плесневых грибов, кандид – определяют по характеру выросших колоний на специальных средах (желточно-солевом агаре, кровяном агаре, среде Сабуро) и при микроскопическом изучении бактерий из этих колоний.

Контрольные вопросы

Каковы особенности ферментных систем бактерий? Как регулируется продукция ферментов у бактерий? Какие группы ферментов различают в зависимости от механизма, которым регулируется продукция фермента? Какое практическое значение имеет изучение ферментативной активности бактерий? Методы изучения сахаролитической и протеолитической активности бактерий. Дифференциально-диагностические среды: перечислите, назовите основные составные части и применение. На какое изменение среды реагирует индикатор в этих средах? По какому признаку дифференцируются бактерии на средах Эндо, Левина, Плоскирева? Каким свойством должны обладать бактерии, чтобы образовать на этих средах окрашенные колонии? Если бактерии образуют бесцветные колонии, что это означает? Среды Гисса их состав и применение. Что такое «пёстрый» или «цветной» ряд? Среда Олькеницкого, её состав; как производится посев и как отмечают на этой среде ферментацию разных углеводов, образование сероводорода? Что представляют собой микротест-системы для определения ферментативной активности микробов; как производят посев и как учитывают результаты? Что такое СИБ; как используется эта система, как производится посев и учёт результатов? Укажите основные объекты внешней среды, которые подвергаются санитарно-бактериологическому исследованию. Микробиоценоз, определение понятия. Перечислите и дайте характеристику межвидовых взаимоотношений в микробиоценозах. Какие показатели определяются при бактериологической оценке объектов внешней среды? Санитарно-показательные микроорганизмы: определение понятия. Какими свойствами должны обладать санитарно-показательные микроорганизмы? Перечислите санитарно-показательные микроорганизмы для воздуха, воды, почвы. Микрофлора воды: постоянная микрофлора, источники загрязнения. Показатели для санитарно-бактериологической оценки воды. Методика определения общего микробного числа воды. Показатели фекального загрязнения воды, методы их определения. Укажите предельно допустимые показатели для питьевой воды. Микрофлора воздуха: постоянная микрофлора, источники загрязнения. Показатели для санитарно-бактериологической оценки воздуха, методы их определения. Микрофлора почвы: постоянная микрофлора, её значение для круговорота веществ в природе. Источники загрязнения почвы патогенными микроорганизмами. Показатели для санитарно-бактериологической оценки. Для каких заболеваний факторами передачи могут быть вода, воздух, почва? Некультивируемые формы бактерий: определение понятия, практическое значение.

ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ

«КАЗАНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ»

МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И

СОЦИАЛЬНОГО РАЗВИТИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

КАФЕДРА МИКРОБИОЛОГИИ

Санитарная микробиология

Учебное пособие

Для студентов медицинских вузов

Казань 2011

УДК 579.63:614.(075.8)

ББК 51.201.7я73

Печатается по решению Центрального координационно-методического совета Казанского государственного медицинского университета

Составители - сотрудники кафедры микробиологии:

профессор О.К.Поздеев, профессор Л.Т.Мусина, доцент А.Н.Савинова,

доцент Е.Р.Федорова, доцент Г.Ш.Исаева, ст. преподаватель С.Б.Богданова,

ассистент Ю.В.Валеева

Рецензенты:

Доцент кафедры микробиологии Казанской государственной медицинской

академии к.б.н. Л.В. Кипенская

Доцент кафедры эпидемиологии Казанского государственного медицинского университета к.м.н. Н.М. Хакимов

Санитарная микробиология. Учебное пособие для студентов медицинских вузов/ О.К.Поздеев, Л.Т.Мусина, А.Н.Савинова, Е.Р.Федорова, Г.Ш.Исаева, С.Б.Богданова, Ю.В.Валеева - Казань: КГМУ, 2011 - 101 с.

Учебное пособие предназначено студентам медицинских вузов для самостоятельного изучения основных разделов санитарной микробиологии. Пособие составлено в соответствии с официально утвержденными программами преподавания микробиологии в медицинских вузах и документами, регламентирующими исследования по санитарной микробиологии. В пособии учтены современные нормативные документы по исследованию воды, воздуха, почвы, пищевых продуктов и ЛПО. Пособие содержит методики санитарно-микробиологического контроля различных объектов, цели и задачи лабораторных занятий, направленных на освоение общекультурных и профессиональных компетенций, учебные карты занятий, вопросы для самоподготовки и самоконтроля, ситуационные задачи и тесты.

Казанский государственный медицинский университет, 2011

1. Список сокращений…………………………………………………………… 4

2. Вводные представления…………………………………………………………5

3. Микрофлора воды………………………………………………………………..9

4. Санитарно-микробиологическое исследование питьевой воды централизованного водоснабжения………………………………….…………11

5. Выявление Legionella pneumophila в объектах окружающей среды………...17

6. Микрофлора воздуха……………………………………………………………..23

7. Санитарно-микробиологическое исследование воздуха в

лечебно-профилактических организациях (ЛПО)……………...……………...25

8. Микрофлора почвы………………………………………………………………30

9. Санитарно-микробиологическое исследование почвы………………………..32

10. Санитарно-микробиологическое исследование пищевых продуктов………...39

11. Основные методы определения санитарно-показательных микробов в

пищевых продуктах ………………………………………………………………40

12. Микрофлора молока и молочных продуктов……………………………………41

13. Микрофлора мяса и мясных продуктов………………………………………….47

14. Исследование мяса……………………………………………………………...... 47

15. Санитарно-микробиологическое исследование полуфабрикатов и готовых

изделий из рубленого мяса………………………………………………………..49

16. Санитарно-микробиологическое исследование колбасных изделий и

продуктов из мяса…………………………………………………………………49

17. Санитарно-микробиологическое исследование рыбы…………………………50

18. Санитарно-микробиологическое исследование напитков……………………..51

19. Санитарно-микробиологическое исследование консервов……………………52

20. Санитарно-микробиологические исследования в лечебно-профилактических

организациях (ЛПО)……………………………………………..……………..…58

21. Санитарно-микробиологические исследования в стационарах

(отделениях) хирургического профиля………….……………………………….58

22. Санитарно-микробиологические исследования в стационарах (отделениях)

акушерского профиля и перинатальных центров………………………………59

23. Санитарно-микробиологические требования к стоматологическим

медицинским организациям……………………………………………………..60

24. Санитарно-эпидемиологические требования к устройству, оборудованию и

эксплуатации фельдшерско-акушерских пунктов (ФАП)……………………..61

25. Лабораторные исследования в ЛПО…………………………………………….61

26. Микробиологический контроль аптек…………………………………………..67

27. Тесты по санитарной микробиологии…………………………………………..83

28. Список литературы……………………………………………………………….100

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

БГКП - бактерии группы кишечной палочки

БОЕ - бляшкообразующие единицы

ГОБ - грамотрицательные бактерии

ГОСТ - государственный стандарт

ГПС - глюкозо-пептонная среда

ЖСА - желточно-солевой агар

ЖСТ - желточная среда Турчинского

КМАФАМ - количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных

микроорганизмов

КОЕ - колониеобразующие единицы

ЛПО - лечебно-профилактические организации

ЛПС - лактозо-пептонная среда

МАФАМ - мезофильные аэробные и факультативно-анаэробные

микроорганизмы

МАФАнМ - мезофильные аэробные и факультативно-анаэробные

микроорганизмы

МЖСА - молочно-желточно-солевой агар

МИС - молочно-ингибиторная среда

МКТ - Мюллера-Кауфмана тетратионатный бульон

МПА - мясо-пептонный агар

МПБ - мясо-пептонный бульон

МСА - молочно-солевой агар

МУК - методические указания

ОКБ - общие колиформные бактерии

ОМЧ - общее микробное число

ПБЛ - питательный бульон для листерий

ПЦР - полимеразная цепная реакция

РА - реакция агглютинации

СанПиН - санитарные правила и нормативы

СП - санитарные правила

СПМ - санитарно-показательные микроорганизмы

ТКБ - термотолерантные колиформные бактерии

ТР - технический регламент

УФ - ультрафиолетовые лучи

ЦРБ - Центральная районная больница

ЩЭС - щелочная элективная среда с полимиксином

XLD - ксилоза-лизин декстрозный агар

RVS - среда Раппопорта-Вессилиадиса с соей

ВВОДНЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ

Санитарная микробиология - направление медицинской микробиологии, изучающее микрофлору окружающей среды и её влияние на здоровье человека и состояние среды его обитания. Началом развития санитарной микробиологии можно считать 1883 г., когда французский врач Э. Масе предложил рассматривать кишечную палочку как показатель фекального загрязнения воды. Изучение микрофлоры и микробиологических процессов в среде обитания человека необходимо для гигиенической оценки его взаимоотношений с окружающей средой.

Знания, умения и навыки, полученные при изучении санитарной микробиологии, способствуют выработке таких общекультурных и профессиональных компетенций, как:

1. Способность и готовность анализировать социально-значимые проблемы и процессы, использовать на практике методы гуманитарных, естественнонаучных, медико-биологических и клинических наук в различных видах профессиональной и социальной деятельности (ОК -1)

3. Способность и готовность применять методы асептики и антисептики, использовать медицинский инструментарий, проводить санитарную обработку лечебных и диагностических помещений медицинских организаций (ПК-7).

4.Способность и готовность использовать нормативную документацию, принятую в здравоохранении (законы Российской Федерации, технические регламенты, международные и национальные стандарты, приказы, рекомендации, терминологию, международные системы единиц (СИ), действующие международные классификации), а также документацию для оценки качества и эффективности работы медицинских организаций (ПК-27).

Основные задачи санитарной микробиологии:

1. Изучение микробных биоценозов во внешней среде

2. Обнаружение во внешней среде патогенных микробов или их токсинов.

3. Обнаружение во внешней среде условно-патогенных микроорганизмов, являющихся косвенными показателями загрязнения изучаемых объектов патогенными микробами.

4. Выявление во внешней среде микроорганизмов, являющихся причиной порчи пищевых продуктов, сырья, строительных материалов.

5. Выработка нормативов, характеризующих гигиеническое состояние объектов внешней среды.

Санитарно – микробиологические исследования проводят:

1. При проведении текущего санитарного надзора

2. При решении вопросов о возможных источниках и путях передачи возбудителей инфекционных заболеваний.

3. При проектировании и выборе места для строительства зданий, населенных пунктов и сельскохозяйственных объектов.

4. При решении вопросов водоснабжения, канализации и обеззараживания отбросов.

Стандартные методы санитарно-микробиологических исследований регламентированы ГОСТами, санитарными правилами (СП), санитарными правилами и нормами (СанПиН) и методическими указаниями (МУК) и техническими регламентами (ТР).

Принципы проведения санитарно-микробиологических исследований.

1. Пробы для исследований следует отбирать с соблюдением всех необходимых условий, регламентированных для каждого исследуемого объекта. Исследования необходимо проводить быстро; при невозможности немедленного проведения анализа материал сохраняют в холодильнике не дольше 6-8 часов.

2. Для получения объективных результатов следует отбирать несколько проб из разных участков объекта.

3. Более адекватные результаты можно получить проведением повторных отборов и анализов проб.

4. При проведении анализов следует использовать только стандартные и унифицированные методы исследования.

5. Интерпретацию результатов санитарно-микробиологических исследований следует проводить с учетом других гигиенических показателей (органолептических, химических, физических).

Применяют 2 основных метода оценки санитарно-гигиенического состояния внешней среды:

1. Прямое обнаружение патогенных микроорганизмов

2. Появление косвенных признаков пребывания патогенных микроорганизмов во внешней среде.

Методы косвенной индикации применяют чаще.

При проведении исследований используют два критерия, по которым можно косвенно судить о возможном присутствии возбудителя во внешней среде: общее микробное число (ОМЧ ) и содержание санитарно-показательных микроорганизмов (СПМ ).

ОМЧ определяют путем подсчета всех микроорганизмов (растущих на питательных средах) в 1 г или 1 мл субстрата.

Санитарно-показательные микроорганизмы (СПМ ) - условно-патогенные микробы, являющиеся облигатными представителями нормальной микрофлоры человека и животных, обнаружение которых во внешней среде свидетельствует о фекальном или воздушно-капельном загрязнении ее выделениями человека.

Основные характеристики СПМ.

1. СПМ должны постоянно обитать в естественных полостях человека и животных и постоянно выделяться во внешнюю среду.

2. СПМ не должны размножаться во внешней среде (исключая пищевые продукты)

3. Длительность выживания СПМ должна быть несколько больше, чем у патогенных микроорганизмов.

4. Устойчивость СПМ во внешней среде должна быть не меньше, чем у патогенных микроорганизмов.

5. У СПМ не должно быть во внешней среде аналогов, с которыми их можно перепутать.

6. СПМ не должны изменяться во внешней среде.

7. Методы идентификации СПМ должны быть простыми.

1. Прямой подсчет числа бактерий с помощью специальных камер счетчиков.

2. Посев на питательные среды.

Титр СПМ - наименьший объем исследуемого материала или минимальное количество субстрата, в котором обнаружена хотя бы одна особь СПМ.

Индекс СПМ - количество особей СПМ, обнаруженных в определенном объеме или определенном количестве исследуемого материала

Перевод индекса в титр и обратно производится делением 1000 на число выражающее индекс, или 1000 на число, обозначающее титр.

НВЧ (наиболее вероятное число) - вероятная оценка числа СПМ в определенном объеме воды или в определенном объеме другого субстрата. Этот показатель имеет доверительные интервалы, в пределах которых может колебаться с вероятностью 95%.

Все СПМ расценивают как индикаторы биологического загрязнения.

Группа А - индикаторы фекального загрязнения - включает обитателей кишечника человека и животных. Это бактерии группы кишечной палочки (БГКП)- эшерихии, сальмонеллы, цитробактерии. Группа А включает также энтерококки, протей, сульфитвосстанавливающие клостридии (Clostridium рerfringens и др.), термофилы, бактериофаги, бактероиды, синегнойную палочку, кандиды и аэромонады.

Группа В - индикаторы орального загрязнения. Включает обитателей верхних дыхательных путей и носоглотки. Это зеленящие α и β-гемолитические стрептококки, стафилококки (гемолизирующие, плазмокоагулирующие, лецитиназа-положительные и антибиотикоустойчивые), в некоторых случаях также определяют вид золотистого стафилококка.

Группа С - индикаторы процессов самоочищения – сапрофитические микроорганизмы, обитающие во внешней среде. К ним относят бактерии-протеолиты, бактерии-аммонификаторы и нитрификаторы, некоторые спорообразующие бактерии, грибы, актиномицеты, целлюлозобактерии, бделловибрионы и сине-зеленые водоросли.

К основным СПМ относят БГКП, энтерококки, протеи, сальмонеллы, Clostridium perfringens , термофильные бактерии и бактериофаги энтеробактерий (колифаги).

Читайте также:

B) должен хорошо знать только физико-химические методы анализа
CAC/RCP 1-1969, Rev. 4-2003 «Общие принципы гигиены пищевых продуктов»
I. ОСНОВНЫЕ ЦЕЛИ, ЗАДАЧИ И ПРИНЦИПЫ ДЕЯТЕЛЬНОСТИ КПРФ, ПРАВА И ОБЯЗАННОСТИ ПАРТИИ
II. Общие принципы построения и функционирования современных бизнес-структур
II. Организация проведения предполетного и послеполетного досмотров

При проведении санитарно-микробиологических исследований необходимо выполнять следующие требования.

1. Правильный отбор проб

Его проводят с соблюдением всех необходимых правил асептики; при хранении и транспортировке необходимо исключить возможность гибели и дополнительного размножения микроорганизмов. При невозможности немедленно сделать анализ материал хранят не более 6-8 часов.

2. Серийность проводимых анализов

Микроорганизмы в объектах окружающей среды распределены крайне неравномерно. Для получения адекватных результатов проводят отбор серии проб из разных участков объекта. При проведении анализов все образцы смешивают и отбирают среднюю пробу.

3. Повторность отбора проб

Для получения сопоставимых результатов осуществляют повторный отбор проб в связи с тем, что в исследуемых образцах состав микробиоты меняется достаточно быстро.

4. Применение стандартных методов исследования

Использование методик, утвержденных ГОСТ, позволяет получать в разных лабораториях сопоставимые результаты.

5. Использование комплекса тестов

Необходимо для получения адекватной информации при сочетании прямых и косвенных методов выявления микроорганизмов с учетом влияния факторов внешней среды и собственной микробиоты объекта.

Микробиологические основы ХАССП...

Глава 4. Источники и пути микробной контаминации.

Современная санитарная микробиология стремится использовать простые, точные и надежные методы. Они направлены на определение общей микробной загрязненности, выявления СПМ и включают:

Прямой подсчет при микроскопии микроорганизмов в объекте;

Методы выделения и идентификации микроорганизмов;

■- биологические методы с использованием лабораторных животных.

Прямой подсчет применяют в экстренных случаях при необходимости срочного ответа о количественном содержании бактерий (например, при авариях в системе водоснабжения, при оценке эффективности работы очистных сооружений и др.). Основной недостаток - невозможность получить точный ответ из-за образования бактериями агломератов или прикрепления к частицам среды. Метод не позволяет отличать живые бактерии от погибших.

Посев на питательные среды производят для количественного подсчета. На плотных питательных средах подсчитывают число выросших колоний. При этом исходят из предположения, что каждая колония является результатом попадания на среду одной жизнеспособной клетки. Данный метод неточен, так как выявляет только группы микроорганизмов, растущих на определенных питательных средах при определенной температуре. Невозможно создать унифицированную, подходящую для всех микроорганизмов среду. Не все микроорганизмы, находящиеся в объекте, дают колонии на питательной среде из-за конкуренции и антагонизма.

Содержание числа живых клеток в объекте отражает показатель количества мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов (КМАФАМ), которое определяется путем подсчета колоний, выросших в агаризованной среде в чашках Петри при температуре 30±1°С в течение 3 дней (72±3). Это определение регламентировано Международной организацией по стандартизации методов микробиологического анализа (International Standart Organisation, ISO) и ГОСТ 10444.15-94. КМАФАМ выражается в колониеобразую-щих единицах (КОЕ) и рассчитывается на 1 г (см 3) образца.

Термин КМАФАМ КОЕ/г (см 3) наиболее полно характеризует определяемую принятыми методами группу микроорганизмов, поэтому в настоящее время его используют вместо обозначений, применявшихся ранее (общее количество бактерий, количество сапротрофов, гетеротрофов в 1 г (см 3), общее микробное число).

Микробиологические показатели безопасности пищевых продуктов для большинства групп микроорганизмов оценивают по альтернативному принципу, то есть нормируется масса продукта, в которой не допускается присутствие определенных видов микроорганизмов.

Современная санитарная микробиология стремится использовать простые, точные и надежные методы. Эти методы направлены на определение общей микробной загрязненности, выявления СПМ и включают: прямой подсчет при микроскопировании микроорганизмов в объекте; методы выделения и идентификации микроорганизмов; биологические методы с использованием лабораторных животных.

Прямой подсчет применяют в экстренных случаях при необходимости срочного ответа о количественном содержании бактерий (например, при авариях в системе водоснабжения, при оценке эффективности работы очистных сооружений и др.). Основной недостаток– невозможность получить точный ответ из-за образования бактериями агломератов или прикрепления к частицам среды. Метод не позволяет отличать живые бактерии от погибших.

Посев на питательные среды проводят для количественного подсчета. На плотных питательных средах подсчитывают число выросших колоний. При этом исходят из предположения, что каждая колония является результатом попадания на среду одной жизнеспособной клетки.

Данный метод неточен, так как выявляет только группы микроорганизмов, растущих на определенных питательных средах при определенной температуре. Невозможно создать унифицированную, подходящую для всех микроорганизмов среду. Не все микроорганизмы, находящиеся в объекте, дают колонии на питательной среде из-за конкуренции и антагонизма.

Содержание числа живых клеток в объекте отражает показатель количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ), которое определяется путем подсчета колоний, выросших в агаризованной среде в чашках Петри при температуре (30±1) 0 С в течение (72±3) часов. Это определение регламентировано Международной организацией по стандартизации методов микробиологического анализа (International Standart Organisation, ISO) и ГОСТ 10444.15-94. КМАФАнМ выражается в колониеобразующих единицах (КОЕ) и рассчитывается на 1 г или 1 см 3 образца.

Термин КМАФАнМКОЕ/г (см 3) наиболее полно характеризует определяемую принятыми методами группу микроорганизмов, поэтому в настоящее его используют вместо обозначений, применявшихся ранее (общее количество бактерий, количество сапрофитов, гетеротрофов) в 1 г (см 3), общее микробное число).

Микробиологические показатели безопасности пищевых продуктов для большинства групп микроорганизмов оценивают по альтернативному признаку , т.е. нормируется масса продукта, в которой не допускается присутствие определенных видов микроорганизмов.

Для количественного учета СПМ применяют также две группы методик – определение индекса и титра.

Индекс – количество особей санитарно-показательных микроорганизмов, обнаруженных в определенном объеме или количестве исследуемого объекта (для воды в 1 дм 3 , для почвы, донных отложений и др. – в 1 г).

Титр – это тот наименьший объем исследуемого материала в см 3 или массовое количество в граммах, в котором обнаружена хотя бы одна особь санитарно-показательного организма.

Индекс – величина обратная титру, и наоборот титр – величина обратная индексу.

Микрофлора окружающей среды

Микрофлора воды

Вода является естественной средой обитания разнообразных микроорганизмов. В воде рек, открытых водоемов, морей, океанов обнаруживаются представители всех таксономических групп микроорганизмов – бактерии, вирусы, грибы, простейшие, водоросли. Совокупность всех микроорганизмов, населяющих водоемы, называется микробиальным планктоном.

Микрофлора природных вод в значительной степени зависит от их происхождения. Различают воды: пресные поверхностные – проточные (воды рек, ручьев) и стоячие (воды озер, прудов, водохранилищ); подземные – почвенные, грунтовые, артезианские; атмосферные – дождь, снег; морские . По характеру использования различают воду питьевую (она бывает централизованного водоснабжения и местного, при котором забор ведется из открытых водоемов или подземных источников), воду плавательных бассейнов, лёд хозяйственный. Особого внимания с санитарной точки зрения требуют сточные воды – хозяйственно-фекальные, промышленные, смешанные (хозяйственно-фекальные и промышленные), талые и ливневые, микрофлора которых загрязняет природные воды. С экологической точки зрения всю микрофлору водоемов можно разделить на две группы – автохтонную и аллохтонную.

Автохтонная микрофлора – это микроорганизмы, живущие и размножающиеся в воде. Состав автохтонной микрофлоры незагрязненных водоемов относительно стабилен и характерен для каждого отдельного водоема. Для морей и соленых озер типична галофильная микрофлора, горячих источников – термофильная, северных водоемов – психрофильная. Микробное население воды также отражает состав микрофлоры почвы, с которой вода непосредственно соприкасается. Автохтонная микрофлора играет значительную роль в круговороте веществ в природе, в процессах самоочищения водоемов и поддержания их биологического равновесия.

Аллохтонная микрофлора – это микроорганизмы, приносимые с различными загрязнениями. Среди них встречаются как представители нормальной микрофлоры организма человека и теплокровных животных, так и возбудители различных болезней. Условия водоемов не являются благоприятной средой для размножения аллохтонных микроорганизмов, поэтому они через определенное время отмирают.

Взаимоотношения между автохтонной и аллохтонной микрофлорой в значительной мере определяют эффективность освобождения водоемов от загрязнения их органическими субстратами и патогенными микроорганизмами, т.е. самоочищение водоемов.

Сапробность (гр.sapros – гнилой) – степень загрязнения водоемов органическими веществами. По шкале сапробности различают три зоны – полисапробные, мезосапробные и олигосапробные. Шкала сапробности была предложена в 1908 г. Кольквитцем и Марссоном.

Полисапробные зоны (зоны сильного загрязнения) содержат большое количество органических веществ, которые легко разлагаются и поэтому усваиваются микроорганизмами. В этих зонах почти полностью отсутствует кислород. Микробное население особенно обильно, но число видов ограничено. Микроорганизмы представлены преимущественно анаэробными бактериями, а также грибами и актиномицетами, вызывающими процессы гниения и брожения. Под влиянием этих микроорганизмов сложные органические соединения распадаются на простые с образованием аммиака, сероводорода, диоксида углерода, метана, индола, скатола и др. Число бактерий в 1 см 3 воды в этой зоне достигает миллиона и более. Преимущественно обнаруживаются палочковидные бактерии (до 80% и более).

Мезосапробные зоны (зоны умеренного загрязнения) характеризуются преобладанием окислительных процессов, нитрификацией. Азотсодержащие соединения распадаются до аммиака, который окисляется до нитритов и нитратов. Общее количество микроорганизмов также велико – сотни тысяч в 1 см 3 воды. Качественный состав микрофлоры разнообразен. В основном это нитрифицирующие бактерии, являющиеся облигатными аэробами. Не менее важным является участие водных микроорганизмов в минерализации углеводсодержащих соединений – целлюлозы, лигнина и др. К этим микроорганизмам относятся аэробные и факультативно-анаэробные бактерии родов Pseudomonas, Mycobacterium, Flavobacterium , грибы родов Streptomyces, Candida и другие, а также анаэробные бактерии рода Clostridium .

Олигосапробные зоны (зоны чистой воды) характеризуются окончанием процесса самоочищения и небольшим количеством органических веществ. Минерализация органического вещества заканчивается. Видовой состав микрофлоры приближается к обычной автохтонной флоре. Количество микроорганизмов в 1 см 3 воды исчисляется десятками, реже сотнями. В чистых водах преобладают кокки (до 80% и более).

Процессы самоочищения воды в водоемах происходят последовательно и непрерывно, характеризуясь постепенной сменой биоценозов. На процессы самоочищения влияет целый ряд факторов: разбавление загрязненных вод чистыми, прозрачность воды, температура, оседание загрязненных частиц, наличие химических веществ, симбиотические и антагонистические взаимоотношения в водных биоценозах.

Микрофлора почвы

Почва является главным резервуаром и естественной средой обитания микроорганизмов в природе. Почва формируется на разрушающихся под действием климатических условий горных породах при участии органических соединений, образуемых в результате разложения растительных и животных организмов. Почвенные микроорганизмы принимают активное участие в процессах формирования и самоочищения почвы, а также в круговороте веществ в природе.

Количественный состав микрофлоры почвы зависит от ее структуры, содержания органических и минеральных соединений, а также влажности, кислотности, аэрации, температуры и других факторов. Число микроорганизмов в 1 г почвы может достигать нескольких миллиардов. Больше всего их находится в унавоженной, подвергающейся обработке почве, меньше – в песках. Количество микроорганизмов подвержено сезонным колебаниям – весной микробное население увеличивается, достигая максимума к лету, в разгар лета уменьшается (в результате наиболее активного воздействия солнечных лучей) осенью опять увеличивается, и снижается зимой. Распределение микроорганизмов по глубине также неравномерно. На поверхности в слое толщиной 1-2 мм относительно мало микроорганизмов из-за влияния ультрафиолетового облучения. Наиболее обильна микрофлора в слое на глубине 10-20 см, где протекают основные биохимические процессы. В более глубоких почвенных слоях микрофлора становится более скудной, и на глубине 4-5 м обнаруживается уже очень мало микроорганизмов.

Качественный состав микрофлоры почвы очень разнообразен. В составе микрофлоры почвы можно выделить различные физиологические группы микроорганизмов, которые участвуют в различных процессах на разных этапах постепенного разложения органических веществ. 1) Микроорганизмы-аммонификаторы, которые вызывают гниение остатков растений, трупов животных, разложение мочевины. 2) Нитрифицирующие бактерии, которые обладают способностью окислять аммиак до азотистой кислоты, образуя нитриты. 3) Микроорганизмы, расщепляющие клетчатку, вызывающие различные виды брожений. 5) Бактерии, участвующие в круговороте серы, фосфора, серы и других элементов.

С выделениями человека и животных, с различными хозяйственно-бытовыми и промышленными стоками в почву попадает громадное количество разнообразных микроорганизмов, в том числе и патогенных. Среди патогенных микроорганизмов можно выделить три группы. 1) патогенные микроорганизмы, постоянно обитающие в почве. К ним относится небольшое количество микроорганизмов. Особого внимания среди них заслуживают клостридии ботулизма, которые попадают в почву с испражнениями человека и животных, образуют споры, остаются в почве долгое время. 2) Спорообразующие патогенные микроорганизмы (бациллы сибирской язвы, клостридии столбняка и газовой гангрены), для которых почва является вторичным резервуаром. При благоприятных условиях эти микроорганизмы могут размножаться в почве и сохраняться в виде спор длительное время. 3) Патогенные микроорганизмы, попадающие в почву с выделениями человека и животных, сохраняющиеся в ней в течение нескольких недель или месяцев. Эти микроорганизмы (сальмонеллы, шигеллы, вибрионы, микобактерии, лептоспиры, бруцеллы и др.) не образуют спор и поэтому быстро гибнут в результате воздействия различных физических и биологических факторов.

Естественные биохимические процессы, происходящие под воздействием микроорганизмов, обуславливают самоочищение и обезвреживание почвы. При правильном управлении такими процессами опасность передачи инфекционных болезней через почву может быть сведена к минимуму.

Микрофлора воздуха

Воздух не является естественной средой обитания микроорганизмов, но играет большую роль в их распространении. Микроорганизмы попадают в воздух из почвы, воды, из организма человека и различных животных. В большинстве случаев эти микроорганизмы не способны размножаться в связи с отсутствием питательных веществ и недостатком влаги.

Источником загрязнения атмосферного воздуха микроорганизмами является в основном почва. На микрофлору атмосферного воздуха оказывают влияние солнечные лучи, колебания температуры, скорость ветра, атмосферные осадки, наличие зеленых насаждений. Микрофлора атмосферного воздуха преимущественно сапрофитная. В атмосферном воздухе микроорганизмов больше летом (особенно в сухую погоду) и меньше зимой.

Обсемененность микроорганизмами воздуха закрытых помещений всегда превышает обсемененность атмосферного воздуха. Это касается также патогенной микрофлоры, которая может попадать от больных людей, животных и микробоносителей. В закрытых помещениях микрофлора воздуха более обильна зимой, что связано с меньшей возможностью проветривания. Контаминация воздуха микроорганизмами происходит в основном капельным путем – при разговоре, кашле, чиханье. Возможно также попадание микроорганизмов со слущиваюшимся эпидермисом кожных покровов, с пылью загрязненных объектов.

В основе воздушно-капельного и воздушно-пылевого механизма передачи инфекционных болезней лежит теория аэрозоля. Аэрозоль представляет собой коллоидную систему, состоящую из воздуха, капелек жидкости или частиц твердого вещества, включающих значительное количество микроорганизмов. Такой аэрозоль выделяет каждый человек или животное при дыхании, кашле и т.п. Размер капелек аэрозоля может быть различным – от 10-100 до 2000 нм. В зависимости от размера капелей, их электрического заряда, скорости движения в воздухе различают капельную, пылевую фазы аэрозоля и капельные ядрышки. Капельная фаза аэрозоля характеризуется присутствием в воздухе мелких капель, длительно в нем удерживающихся и высыхающих прежде, чем они успевают осесть. Крупные капли аэрозоля быстро оседают под действием силы тяжести и высыхают, образуя пыль, которая при определенных условиях поднимается в воздушную среду – это пылевая фаза аэрозоля. Мелкие капельки аэрозоля (до 100 нм) высыхая, остаются в воздухе во взвешенном состоянии и образуют устойчивую аэродисперсную систему – капельные ядрышки , которые могут переноситься на значительные расстояния. В капельных ядрышках частично сохраняется влага, что обуславливает жизнеспособность в них микроорганизмов. Наибольшую опасность для здоровья представляют микроорганизмы в мелких частицах (до 100 нм), которые способны проникать глубоко в альвеолы легких, преодолевая защитные барьеры верхних дыхательных путей.

Пищевые заболевания

Согласно СанПиН 2.1.3.1375-03, воздушная среда помещений лечебных учреждений и аптек по уровню бактериальной обсемененности разделена на 4 класса.

Микробиологические показатели для оценки воздушной среды аптечных учреждений можно определить путем посева воздуха седиментационным (по Коху) или аспирационным методом (в аппарате Кротова).

Класс чистоты	Название помещений	Санитарно-микробиологические показатели
общее количество микроорганизмов в 1 м 3 воздуха (КОЕ/м 3)	количество колоний S.aureus в 1 м 3 воздуха (КОЕ/м 3)	количество плесневых и дрожжевых грибов в 1 дм 3 воздуха
До начала	Во время работы	До начала	Во время работы	До начала	Во время работы
Особо чистые(А)	Операционные, родильный зал, асептические боксы для гематологических, ожоговых больных, палата для недоношенных, асептический блок аптек, стерилизационные (чистая половина) боксы бактериологических лабораторий	не более200	не более500	не должно быть	не должно быть	не должно быть	не должно быть
Чистые(Б)	Процедурные, перевязочные, предоперационные, палаты реанимации, залы реанимации, детские палаты, комнаты сбора и пастеризации грудного молока, ассистентские и фасовочные аптек, дистилляторная,помещения бактериологических и клинических лабораторий, предназначенные для исследований	не более500	не более750	не должно быть	не должно быть	не должно быть	не должно быть
Условно чистые(В)	Палаты хирургических отделений; коридоры, примыкающие к операционным и родильным залам; смотровые, боксы и палаты инфекционных отделений, ординаторские, материальные, кладовые чистого белья	не более750	не более1000	не должно быть	не более2	не должно быть	не должно быть
Грязные (Г)	Коридоры и помещения административных зданий, лестницы, лечебно-диагностические, санитарные комнаты, туалеты, комнаты грязного белья	Не нормируются

После инкубации посева в термостате проводят расчет микробного числа по формуле:

ОМЧ	=	N ∙ 1000
V

где N – количество выросших на чашке колоний;

V – объём пропущенного через прибор воздуха, дм 3 ;

1000 - искомый объём воздуха, дм 3 .

Контрольные вопросы.

Каковы особенности ферментных систем бактерий? Виды ферментов: по их действию; по выделению в окружающую среду; конститутивные и адаптивные ферменты. Какое практическое значение имеет изучение ферментативной активности бактерий? Методы изучения протеолитической и сахаролитической активности бактерий. Дифференциально-диагностические среды: перечислите, назовите основные составные части и применение. На какое изменение среды реагирует индикатор в этих средах? По какому признаку дифференцируются бактерии на средах Эндо, Левина, Плоскирева? Каким свойством должны обладать бактерии, чтобы образовать на этих средах окрашенные колонии? Если бактерии образуют бесцветные колонии, что это значит? Среды Гисса, их состав и применение. Что такое «пёстрый» или «цветной» ряд? Среда Олькеницкого, как производится посев и как отмечают на этой среде ферментативные свойства бактерий? Методы определения протеолитической активности бактерий: разжижение желатина, образование индола, сероводорода, аммиака. Что представляют собой микротестсистемы для определения ферментативной активности бактерий: как производят посев и как учитывают результаты? Что такое СИБ, как используется эта система, как производится посев и учёт результатов?Микрофлора воздуха: какие микробы чаще всего встречаются, как меняется микрофлора в зависимости от условий. Что такое микробное число воздуха, какими методами оно определяется? Что такое санитарно-показательные микроорганизмы? Какие микробы считаются санитарно-показательными для воздуха? Какие патогенные микробы могут передаваться через воздух?Определите понятия: нормальная микрофлора организма человека; постоянная микрофлора; транзиторные микроорганизмы; потенциально опасные микроорганизмы. Назовите органы и ткани, свободные от постоянной микрофлоры. Какие микробы относятся к постоянной микрофлоре полости рта и какое значение имеют в норме и патологии? Характеристика микрофлоры различных областей организма: полости рта, желудочно-кишечного тракта, органов дыхания. Значение нормальной микрофлоры - положительное и отрицательное. Что такое дисбактериоз, в чём он выражается, причины его возникновения и способы предупреждения и устранения. Назовите препараты, применяемые для устранения дисбактериоза, что они содержат, как применяются, что с ними происходит в организме человека.